Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2024; 26(1):79-86
Разработать метод выявления генетических детерминант устойчивости клинических изолятов Mycobacterium leprae к трем группам антимикробных препаратов: дапсону, рифампицину и фторхинолонам.
В работе использовали клинические изоляты M. leprae, полученные от пациентов, находящихся на лечении в Сергиево-Посадском филиале «ГНЦДК» Минздрава России с диагнозами «Лепра. Лепроматозный тип», «Лепра мультибактериальная, пограничная форма». Выделение тотальной ДНК из анализируемых образцов после их гомогенизации проводили с использованием набора «Проба-НК» (Россия). Выбор последовательностей олигонуклеотидов и гибридизационных зондов для амплификации участков генома M. leprae, потенциально содержащих детерминанты резистентности, осуществлен согласно информации портала BLAST, а их синтез выполнен ООО «Синтол» (Россия). Первый этап амплификации целевых фрагментов генома M. leprae проведен с использованием набора «QIAGEN Multiplex PCR kit» (Германия), а последующее минисеквенирование – с использованием набора «SNaPshot» на приборе ABI 3130 GeneticAnalyser (Applied Biosystems, США). Анализ полученных данных проводили с использованием Peak Scanner Software.
Разработан метод минисеквенирования, позволяющий одновременно выявлять шесть наиболее распространенных генетических детерминант устойчивости M. leprae к антимикробным препаратам непосредственно в кожном биоптате пациента. Анализируемые детерминанты расположены в участках, определяющих возникновение резистентности к дапсону – в геномном локусе folP1 (T53, Р55), рифампицину – в гене rpoB (D441, H451, S456) и фторхинолонам – в гене gyrA (A91). Контрольной реакцией, подтверждающей присутствие M. leprae в биоптате кожи, является ПЦР с использованием праймеров к некодирующему повторяющемуся элементу генома лепры RLEP. Апробация метода на образцах клинического материала от пациентов больных лепрой показала отсутствие значимых детерминант устойчивости M. leprae к антимикробным препаратам, наиболее часто используемым для терапии данного заболевания.
Система быстрой идентификации устойчивости M. leprae к антимикробным препаратам представляется важным инструментом для персонализации медицинской помощи больным лепрой с возможностью выбора оптимальной схемы химиотерапии.