Аннотация
Целью работы было сравнение MALDI Biotyper и алгоритма микробиологической диагностики для идентификации неферментирующих микроорганизмов, выделенных из дыхательных путей у больных муковисцидозом. Использовали разработанный алгоритм идентификации и типирования, включающий бактериологические, биохимические, молекулярно-биологические методы и систему MALDI Biotyper. В результате проведённых исследований удалось идентифицировать 47 видов неферментирующих микроорганизмов и установить, что наиболее трудной является идентификация микроорганизмов, принадлежащих к роду Achromobacter и Burkholderia cepacia complex (Bcc). Она требует применения комплекса бактериологических, биохимических, молекулярно-биологических методов, а также системы MALDI Biotyper, которая позволяет более точно и быстро идентифицировать роды и виды микроорганизмов. Представители рода Achromobacter были выделены от 89 взрослых пациентов и детей с муковисцидозом, среди которых 82,7% принадлежали виду Achromobacter ruhlandii и 10,6% — виду Achromobacter xylosoxidans. Были идентифицированы 60 штаммов Bcc трёх видов, из них 32 штамма Всс от взрослых пациентов и 28 от детей, 83,3% которых принадлежали виду B. cenocepacia. От взрослых пациентов и детей c муковисцидозом из Москвы выделяли B. cenocepacia, из Санкт-Петербурга — B. contaminans, B. cepacia, из Хабаровска — B. cepacia, B. cenocepacia, B. contaminans. От детей и взрослых были выделены 57 штаммов 11 видов рода Pseudomonas, из них 41 изолят (71,9%) был идентифицирован как P. aeruginosa, среди которых было 8 изолятов с атипичным фенотипом. Более простой представляется идентификация другого представителя неферментирующих микроорганизмов — P. aeruginosa, за исключением выделения штаммов с атипичным фенотипом, но и в этом случае использование масс-спектрометрии имеет решающее значение.
ФГБУ «НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
ФГБУ «НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
ФГБУ «НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
ФГАОУ ВО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России, Москва, Россия
ФГБУ «НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
ФГБУ «НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
ФГБУ «НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
ФГБУ «НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
ФГБУ «НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
ФГБУ «НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
ФГБУ «НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», Москва, Россия
ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», Москва, Россия
ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», Москва, Россия
ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», Москва, Россия
ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», Москва, Россия
ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», Москва, Россия
ФГБУ «НИИ пульмонологии» ФМБА России, Москва, Россия
ФГБУ «НИИ пульмонологии» ФМБА России, Москва, Россия
ФГБУ «НИИ пульмонологии» ФМБА России, Москва, Россия
-
1.
Chernukha M.Yu., Avetisyan L.R., Shaginyan I.A., et al. Microbiological Diagnosis Algorithm for Chronic Lung Infection in Patients with Cystic Fibrosis. Klinicheskaja mikrobiologija i antimikrobnaja himioterapija. 2014;16(4):278-290. Russian. (Чернуха М.Ю., Аветисян Л.Р., Шагинян И.А. и соавт. Алгоритм микробиологической диагностики хронической инфекции лёгких у больных муковисцидозом. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2014;16(4):278-290.).
-
2.
Anhalt J.P., Fenselau C. Identification of bacteria using mass spectrometry. Analyt Chem. 1975;500(2):219-225.
-
3.
Demidov E.A., Starostin K.V., Popik V.M., Peltek S.E. MALDI-Tof Mass Spectrometry in Microorganism Identification. Vavilovskij zhurnal genetiki i selekcii. 2013;17(4/1):758-76
-
4.
Russian. (Демидов Е.А., Старостин К.В., Попик В.М., Пельтек С.Е. Применение МАЛДИ времяпролетной масс-спектрометрии для идентификации микроорганизмов. Вавиловский журнал генетики и селекции. 2013;17(4/1):758-764.). 4. Priputnevitch T.V., Melkumyan A.R., Burmenskaya O.V., et al. Use of MALDITOF Mass-Spectrometry and Quantitative PCR for Rapid Diagnosis of Sepsis. Klinicheskaja mikrobiologija i antimikrobnaja himioterapija. 2014;16(1):49. Russian. (Припутневич Т.В., Мелкумян А.Р., Бурменская О.В. и соавт. Использование методов MALDI-TOF масс-спектрометрии и количественной ПЦР для быстрой диагностики септических состояний. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2014;16(1):4-9.).
-
5.
Patel R. MALDI-TOF MS for the Diagnosis of Infectious Diseases. Clin Chem. 2015;61(1):100-111.
-
6.
Bauernfeind A., Schneider I., Jungwirth R., Roller C. Discrimination of Burkholderia multivorans and Burkholderia vietnamiensis from Burkholderia cepacia genomovars I, III, and IV by PCR. J Clin Microbiol. 1999;37(5):13351339.
-
7.
Mahenthiralingam E., Bischof J., Byrne S.K., et al. DNA-based diagnostic approaches for identification of Burkholderia cepacia complex, Burkholderia vietnamiensis, Burkholderia multivorans, Burkholderia stabilis and Burkholderia cepacia genomovars I and III. J Clin Microbiol. 2000;38:3165-173.
-
8.
Lambiase A., Catania M.R., Del Pezzo M., et al. Achromobacter xylosoxidans respiratory tract infection in cystic fibrosis patients. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2011;30(8):973-980.
-
9.
List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature. Available at: www.bacterio.net/achromobacter.html.
-
10.
Voronina O.L., Kunda M.S., Ryzhova N.N., et al. Diversity and hazard of respiratory infection of Achromobacter spp. in cystic fibrosis patients. Pul'monologija. 2015;25(4):389-401. Russian. (Воронина О.Л., Кунда М.С., Рыжова Н.Н. и соавт. Разнообразие и опасность Achromobacter spp., поражающих дыхательные пути больных муковисцидозом. Пульмонология. 2015;25(4):389-401.).
-
11.
Krasovskii S.A., Nikonova V.S., Kashirskaya N.Y., et al. Clinical and Genetic, Microbiological and Functional Characteristics of Moscow and Moscow Region Patients with Cystic Fibrosis. Voprosy sovremennoj pediatrii. 2013;12(1):24-30. Russian. (Красовский С.А., Никонова В.С., Каширская Н.Ю. и соавт. Клинико-генетическая, микробиологическая и функциональная характеристика больных муковисцидозом, проживающих в Москве и Московской области. Вопросы современной педиатрии. 2013;12(1):24-30.).
-
12.
Sousa S.A., Ramos C.G., Leitão J.H. Burkholderia cepacia Complex: Emerging Multihost Pathogens Equipped with a Wide Range of Virulence Factors and Determinants. Int J Microbiol. 2011;2011. pii: 607575.
-
13.
Alexeeva G.V., Chernukha M.Yu., Shaginyan I.A. Identification of Burkholderia cepacia complex bacteria with PCR. In guidance manual for bacteriologists: Polymerase chain reaction (PCR) and its application in bacteriology. Moscow, 2006. 142 p. Russian. (Алексеева Г.В., Чернуха М.Ю., Шагинян И.А. Идентификация бактерий комплекса Burkholderia cepacia с помощью ПЦР. Учебно-методическое пособие для врачей-бактериологов «Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ее применение в бактериологии». Москва, 2006. 142 c.).
-
14.
Voronina O.L., Kunda M.S., Aksenova E.I., et al. The express diagnostic of microorganisms affecting respiratory tract of patients with mucoviscidosis. Klinicheskaja laboratornaja diagnostika. 2013;11:53-58. Russian. (Воронина О.Л., Кунда М.С., Аксенова Е.И. и соавт. Экспресс диагностика микроорганизмов поражающих дыхательные пути больных муковисцидозом. Клиническая лабораторная диагностика. 2013;11:53-58.).
-
15.
Shaginyan I.A., Kapranov N.I., Chernukha M.Yu., et al. Microbial landscape of the lower respiratory tract in different age groups of children suffering from cystic fibrosis. Zhurnal mikrobiologii, jepidemiologii i immunobiologii. 2010;1:15-20. Russian. (Шагинян И.А., Капранов Н.И., Чернуха М.Ю. и соавт. Микробный пейзаж нижних дыхательных путей у различных возрастных групп детей, больных муковисцидоз. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2010;1:15-20.).
-
16.
Chernukha M.Yu., Shaginyan I.A. Microbiology of chronic lung infection in patients with cystic fibrosis. In: Cystic fibrosis. M.: Medpraktika-M, 2014. 672 p. Russian. (Чернуха М.Ю., Шагинян И.А. Микробиология хронической инфекции легких у больных муковисцидозом. В книге «Муковисцидоз». М.: Медпрактика-М, 2014. 672 с.).
-
17.
Wellinghausen N., Köthe J., Wirths B., Sigge A., Poppert S. Superiority of molecular techniques for identification of Gram-negative, oxidase-positive rods, including morphologically nontypical Pseudomonas aeruginosa, from patients with cystic fibrosis. J Clin Microbiol. 2005;43:4070-4075.